Water from different sources used for the irrigation of vegetables to be marketed: research on Cryptosporidiumspp, giardiaspp, and Coliforms in Parana, Brazil / Água de diferentes fontes utilizadas na irrigação de hortaliças comercializadas: pesquisa de Cryptosporidiumspp, giardiaspp, e coliformes, Paraná, Brasil

SUMMARYThe aim of this work was to compare, from a parasitological ( Cryptosporidiumspp. and Giardia duodenalis), bacteriological (total and thermotolerants coliforms) and physicochemical perspective, water sources used for drinking and irrigation of vegetables intended to be sold for human consumption. From January 2010 to May 2011, samples of different water sources from vegetable producing properties were collected; 100 liters for parasitological analysis, 200 mL for bacteriological analysis, and five liters for physicochemical analysis. Water samples were filtered under vacuum with a kit containing a cellulose acetate membrane filter, 1.2 µm (Millipore(r), Barueri, SP, Brazil). The material retained on the membrane was mechanically extracted and analyzed by direct immunofluorescence (Merifluor(r)kit). From 20 rural properties investigated, 10 had artesian wells (40 samples), 10 had common wells (40 samples), and one had a mine (four samples), the latter contaminated by Cryptosporidiumspp. In samples from artesian wells, 90 to 130 meters depth, 42.5% were positive for total coliforms and 5.0% were identified to have abnormal coloration. From the samples of common wells, 14 to 37 meters depth, 87.5% were contaminated with total coliforms, 82.5% were positive for thermotolerant coliforms, and 12.5% had color abnormalities. We did not detect the presence of Giardiaspp. or Cryptosporidiumspp. in artesian and common wells. The use of artesian or common wells is an important step in the control of the spreading of zoonoses, particularly Cryptosporidiumspp. and Giardiaspp., as well as artesian wells for coliform control in local production of vegetables to be marketed.

RESUMOO objetivo do estudo foi investigar fontes de água utilizadas para consumo e irrigação de hortaliças a serem comercializadas sob o aspecto parasitológico ( Cryptosporidiumspp. e Giardia duodenalis), bacteriológico (coliformes totais e termotolerantes) e físico-químico. De janeiro de 2010 a maio de 2011 foram coletadas amostras de água de diferentes fontes de abastecimento de propriedades produtoras de hortaliças; 100 litros para análise parasitológica, 200 mL para bacteriológica e cinco litros para análise físico-química. As amostras de água foram filtradas a vácuo com um kit de filtragem contendo uma membrana de acetato de celulose, 1,2 µm, (Millipore(r), Barueri, São Paulo, Brasil). O material retido na membrana foi extraído mecanicamente e analisado por imunofluorescência direta (kit Merifluor(r)). De 20 propriedades rurais, 10 tinham poços artesianos (40 amostras), 10 semi-artesianos (40 amostras) e um possuía uma mina (quatro amostras). Esta última contaminada por Cryptosporidiumspp. Das amostras de poços artesianos com 90 a 130 metros de profundidade, 42,5% foram positivas para coliformes totais e 5,0% apresentavam coloração alterada. Em amostras de poços semi-artesianos com 14 a 37 m de profundidade, 87,5% apresentaram coliformes totais, 82,5% termotolerantes, e 12,5% destas amostras tinham alteração de cor. Não foi detectada a presença de Giardiaspp. e Cryptosporidiumspp. em poços artesianos ou semi-artesianos. A utilização de poços artesianos ou semi artesianos constitui importante medida no controle da disseminação de zoonoses, principalmente Cryptosporidiumspp. e Giardiaspp., assim como de poços artesianos para o controle de coliformes, em locais de produção de hortaliças irrigadas, a serem comercializadas.

Enteropatógenos relacionados à diarréia em pacientes HIV que fazem uso de terapia anti-retroviral / Enteropathogens relating to diarrhea in HIV patients on antiretroviral therapy

A etiologia do processo diarréico na AIDS pode ser causada por vírus, bactérias, fungos, protozoários e helmintos, assim como pelo próprio HIV. Este trabalho avaliou enteropatogenos relacionados à diarréia em pacientes HIV que fazem uso de terapia anti-retroviral. Os métodos parasitológicos utilizados foram Faust, Hoffmann e Kinyoun. O isolamento e cultura dos fungos foram realizados conforme metodologia recomendada por NCCLS M27-A standard. A identificação das espécies de leveduras foi realizada através da reação em cadeia da polimerase. O isolamento de bactérias, foi feito em agar Mac Conkey e agar SS, a identificação das espécies através do Enterokit B (Probac do Brasil) e métodos bioquímicos. Foram avaliados 49 pacientes, 44,9 por cento apresentaram enteroparasitas, 48,1 por cento Candida sp com 61,5 por cento Candida albicans, 7,6 por cento Candida sp e 30,7 por cento Candida não- albicans. Foram isoladas bactérias de 72 por cento dos pacientes, 49 por cento Escherichia coli, 13 por cento Salmonella parathyphi, Klebsiella sp ou Proteus e 6 por cento Citrobacter freundii ou Yersinia sp. Houve alta prevalência de Candida sp nos pacientes HIV com diarréia e foram isoladas espécies não albicans cuja presença pode ser entendida como cúmplice ou causa da infecção.

The etiology of the diarrheic process in AIDS may be caused by viruses, bacteria, fungi, protozoa or helminths, as well as HIV itself. This study evaluated enteropathogens relating to diarrhea in HIV patients who were on antiretroviral therapy. The parasitological methods used were Faust, Hoffmann and Kinyoun. Isolation and culturing of fungi were carried out in accordance with the methodology recommended by the NCCLS M27-A standard. The yeast species were identified using the polymerase chain reaction (PCR). Bacteria were isolated on MacConkey and SS agar and the species were identified using Enterokit B (Probac do Brasil) and biochemical methods. Forty-nine patients were evaluated: 44.89 percent presented enteroparasites and 48.1 percent presented Candida sp, of which 61.5 percent were Candida albicans, 7.6 percent were Candida sp and 30.7 percent were Candida non-albicans. Bacteria were isolated from 72 percent of the patients, of which 49 percent were Escherichia coli, 13 percent Salmonella parathyphi, Klebsiella sp or Proteus and 6 percent Citrobacter freundii or Yersinia sp. There was high prevalence of Candida sp in HIV patients with diarrhea and non-albicans species were isolated. Their presence could be taken to mean that they were accomplices in or causes of the infection.

Blastocystis sp. and other intestinal parasites in hemodialysis patients

Chronic renal insufficiency disease (CRI) leads to uremia in hemodialysis patients and induces a state of immunodepression that results in higher frequencies of infections and diarrhea. Hemodialysis patients resident in the city of Campo Mourão, Paraná, Brazil were analyzed from April 2006 through September 2007 for Blastocystis sp. and other intestinal parasites and for associated diarrhea. Fecal samples from 86 hemodialysis patients and 146 healthy (reference) persons were examined by standard methods for detecting ova, larvae and cysts, which included preservation in 10 percent formalin and the Kinyoun method. Thirty-three hemodialysis patients (45.1 percent) and 36 reference individuals (25.7 percent) were found to be parasitized. The differences in the percentages of parasitism and polyparasitism between the reference group and the chronic renal patients was significant (p= 0.0318 and 0.0019, respectively). Blastocystis sp. (18 percent-20.1 percent), Endolimax nana (14 percent-16.3 percent), Cryptosporidium sp. (4 percent-4.7 percent) and Entamoeba coli (4 percent-4.7 percent) were the most frequent protozoa found in the hemodialysis patients. Parasitism was not significantly associated with diarrhea (p=0.9947) or with decreased white blood cell counts (p=0.7046) in these individuals. Because parasitic infections may be an important comorbidity factor in hemodialysis patients, we suggest that parasitological stool examinations, especially for Blastocystis sp. and Cryptosporidium sp., be included in routine medical follow-up examinations of these patients.

Avaliação da água do sistema de abastecimento municipal de Maringá, PR, com relação à possível ocorrência de Cyptosporidium sp. e Giardia sp. / Evaluation of the water of the public water treatment system of Maringá, Pr, with regard to possible occurrence of Cryptosporidium sp. e Giardia sp

O objetivo deste estudo foi avaliar e comparar os resultados das análises microbiológicas e físico-químicas da água “in natura” e da água tratada pela Companhia de Saneamento do Paraná (SANEPAR), de Maringá, Paraná, com dados da literatura que se referem à relação entre esses parâmetros e a presença de Cryptosporidium sp. e Giardia sp. Foram coletadas 186 amostras de água, sendo 93 “in natura” e 93 de águatratada. As análises microbiológicas (coliformes totais e termotolerantes) e físico-químicas (turbidez, pH, ferro, fluoretos, cor e cloro) foram realizadas de acordo com a metodologia descrita pelo Standart Methods for the Examination of Water and Wastewater. Os resultados destas análises encontravam-se em conformidade com os requerimentos regulatórios, entretanto, comparando estes resultados com aqueles encontrados na literatura, mesmo a água tratada obedecendo às normas da Portaria estabelecida pelo Ministério da Saúde, não elimina a possibilidade de ocorrência desses protozoários. O presente estudo suporta a recomendação de que a pesquisade indicadores para Cryptosporidium sp e Giardia sp e de metodologias que sejam simples, sensíveis, eficientese de baixo custo para a pesquisa destes protozoários em águas de abastecimento precisam ser continuadas.

The objective of this study was to evaluate and compare the results of microbiological and physical-chemical analyses of untreated and treated water from the Sanitation Company of Paraná (SANEPAR) of Maringá,Paraná, with literature data relating to the relation between these parameters and the presence of Cryptosporidium sp. and Giardia sp. We collected 186 water samples, 93 of treated water and 93 of untreatedwater. The microbiological analyses (total and thermotolerant coliforms) and physical-chemical analyses(turbidity, pH, iron, fluorides, color and chlorine) were carried out in accordance with the methodology describedin the Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. The results of these analyses met incompliance with legislation; however, comparing these results with those found in literature does not eliminate the possibility of the occurrence of these protozoans. The present study supports the recommendation for the continuation of research of indicators for Cryptosporidium sp and Giardia sp, as well as methodologies that aresimple, sensible, efficient and affordable for the research of these protozoans in water supplies.

El objetivo de este estudio fue evaluar y comparar los resultados de los análisis físico-químicas y microbiológicos del agua in natura y del agua tratada por la Compañía de Saneamiento del Paraná (SANEPAR),de Maringá, Paraná, con los datos de la literatura que se refieren a la relación entre esos parámetros y lapresencia de Cryptosporidium sp. y Giardia sp. Fueron recogidas 186 muestras de agua, siendo 93 de aguatratada y 93 de agua in natura. Los análisis microbiológicos (coliformes totales y termotolerantes) y los físicoquímicas(turbidez, pH, hierro, fluoruro, color y cloro) fueron realizadas de acuerdo con la metodología descritapor Standart Methods for the Examination of Water and Wastewater. Los resultados de estos análisis se encontraban en conformidad con la legislación, no obstante, comparando estos resultados con aquellos encontrados en la literatura, mismo el agua tratada obedeciendo a las normas establecidas por el Ministerio dela Salud, no elimina la posibilidad de ocurrencia de estos protozoarios. El actual estudio soporta la recomendación de que la investigación de los indicadores para el Cryptosporidium sp. y Giardia sp. y de las metodologías que sean simples, sensibles, eficientes y de bajo costo para la investigación de estos protozoariosen aguas de abastecimiento necesitan ser continuadas.

Isolamento, viabilidade em baixas temperaturas e cultivo axênico de cistos de Giardia duodenalis em pacientes da região noroeste do Paraná / Isolation, viability in low temperatures and axenic culture of cysts of Giardia duodenalis of patients of the region the northwest of the Paraná

A giardiose é um grande problema de saúde pública. O objetivo deste trabalho foi isolar cistos de Giardia duodenalis a partir de fezes humanas, verificar a viabilidade dos cistos em função do tempo de estocagem embaixa temperatura e promover o desencistamento para obtenção de trofozoítos para cultura axênica. Os cistosforam isolados e purificados, de acordo com a técnica de Roberts-Thompson et al. As amostras foram divididas em duas partes, uma das partes foi utilizada para verificar a viabilidade dos cistos estocados à baixa temperatura, e a outra foi submetida à axenização, desencistamento e cultivo. Para o desencistamento,utilizaram-se as técnicas de Bingham-Meyer e de Feely et al. A viabilidade dos cistos em função do tempo deestocagem em baixa temperatura decresceu com o tempo de armazenamento. Não foram observadas mudanças estatisticamente significativas na viabilidade das amostras isoladas, após 24, 48, 72 horas e nos dois meses seguintes. Do terceiro ao quinto mês, houve decréscimo na porcentagem de cistos viáveis e, nonono mês, perda total da viabilidade. Não foi observado crescimento in vitro das amostras axenizadas. Este estudo poderá contribuir para expandir os conhecimentos deste parasito e, posteriormente, auxiliar na detecção de diferenças entre cepas.

Giardiosis is a serious public health problem. The objective of this work was to isolate cysts of Giardia duodenalis taken from human stools, in order to verify the viability of the cysts in function of the time ofstockage in low temperature, as well as to obtain trophozoites for axenic culture. The isolated cysts were isolated and purified using the technique of Roberts-Thompson et al. The samples were divided in two groups; one was used to verify the viability of the stored cysts in low temperature, while the other was submitted toaxenization, excystation and culture. For excystation, two techniques were used. The viability of the cysts’stockage in low temperature decreased with storage time. Statistically significant changes in the viability of theisolated samples were not observed after 24, 48, 72 hours, and in the following two months. From the third tothe fifth month, there was a decrease in the percentage of viable cysts, and the ninth month total loss of viability occurred. Growth in vitro of the axenic samples was not observed. This study will be able to contribute to expanding the knowledge of this parasite and, later aid in the detection of differences between types.

La giardiosis es un gran problema de salud pública. El objetivo de este trabajo fue aislar quistes de Giardia duodenalis a partir de los excrementos de seres humanos, verificar la viabilidad de los quistes en función deltiempo de almacenamiento en baja temperatura y promover el desenquistamiento para la obtención detrofozoitos para la cultura axénica. Los quistes fueron aislados y purificados, de acuerdo con la técnica deRoberts-Thompson et. al. Las muestras fueron divididas en dos partes, una de las partes fue utilizada paraverificar la viabilidad de los quistes mantenidos en bajas temperaturas, y otra fue sometida al axenización, al desenquistamiento y cultivo. Para el desenquistamiento, se utilizaron las técnicas de Bingham-Meyer y de Feelyet. al. La viabilidad de los quistes en función del tiempo de mantenimiento en baja temperatura disminuyó conel tiempo de almacenamiento. No fueron observados cambios estadísticamente significativos en la viabilidad delas muestras aisladas, después de 24, 48, 72 horas y en los dos meses siguientes. Del tercero al quinto mes, hubo una disminución del porcentaje de quistes viables y, en el noveno mes, ocurrió pérdida total de laviabilidad. No fue observado crecimiento in vitro de las muestras axenizadas. Este estudio podrá contribuir para ampliar los conocimientos de este parásito y, más adelante auxiliar en la detección de diferencias entre cepas.

Análise parasitológica de hortaliças comercializadas na central de abastecimento do município de maringá- Paraná / Parasitological analysis of vegetables commercialized in the Food Supply Center of the municipality of Maringá, Paraná State, Brazil

Este estudo avaliou a contaminação parasitológica de hortaliças consumidas cruas que são comercializadas no CEASA do município de Maringá, Paraná; as condições higiênico-sanitárias do local e dos comerciantes. Foram analisadas 30 amostras de alface crespa; 30 de rúcula; 27 de espinafre e 24 de agrião pela técnica descrita por Oliveira e Germano, em duplicata, e pelo método de Ziehl-Neelsen, modificado por Henriksen-Polenz. A avaliação das condições higiênico-sanitárias do local e dos hábitos dos comerciantes foi efetuada por meio de questionário estruturado, pré-codificado. As hortaliças mais contaminadas foram o agrião e a rúcula, com índices de parasitismo maiores que 80 por cento. Foram encontrados oocistos de coccídeos, ovos e larvas das superfamílias Rhabdiasoidea e Ancylostomatoidea. Não foram encontradas amostras parasitadas por Cryptosporidium sp. A avaliação das condições higiênico-sanitárias do local e dos hábitos dos comerciantes demonstrou que as hortaliças ficavam expostas à poeira e ao trânsito de veículos pesados; a falta de paramentação dos distribuidores e ao manuseio concomitantemente de verduras e dinheiro em 40 por cento dos comerciantes. Conclui-se que as condições de horticultura, transporte, distribuição e manipulação de hortaliças precisam ser constantemente avaliadas e a população, diretamente envolvida.

The aim of this work was to evaluate parasitologicaly the vegeta¬bles that are consumed raw and are marketed in the Food Supply Center of Maringá City (Paraná State-Brazil), the hygienic-sanitary conditions of the place and of the merchants. Thirty samples of curly lettuce, 30 of rocket-salad, 27 of spinach and 24 of watercress were analyzed by Oliveira & Germano technique, in duplicate, and by Ziehl-Neelsen method modified by Henriksen-Polenz. The evaluation of the hygienic-sanitary conditions of the place and of the merchants' habits was made by an epidemiological data collection instrument. Watercress and rocket salad, which contamination index was upper than 80 percent, show the major number of contaminants. Coccidian oocysts, Superfamily Rhabdiasoidea and Ancylostomatoidea eggs and larvae were the mainly parasites found. There were no green vegetables parasited by Cryptosporidium sp. The hygienic-sanitary conditions of the place and of the merchants' habits showed irregularities. The vegetables were exposed to dust and to trucks traffic, the distributors were not appropriately dressed and 40 percente of the merchants handled green veg¬etables and money at the same time. The horticulture conditions, transport, distribution and manipulation of vegetables need to be constantly appraised and the population directly involved enlighten in order to improve the quality of green vegetables.

Qualidade de hortaliças comercializadas no noroeste do Paraná, Brasil / Quality of green vegetables marketed in the northwest of Parana, Brazil

O objetivo deste trabalho foi avaliar parasito-logicamente a qualidade de hortaliças consumidas cruas provenientes de locais de produção e de feiras livres do município de Maringá, Paraná. De julho/2002 a julho/2004, foram coletadas 66 amostras de hortaliças em 13 chácaras e 181 amostras em 17 feiras livres. Pés de alface (variedades lisa, crespa e americana), maços de agrião e rúcula, recolhidos aleatoriamente e em triplicata foram submetidos às técnicas de Oliveira & Germano, Kynioun e à pesquisa de coliformes totais e termotolerantes. O índice total de parasitismo das hortaliças de feiras (63 por cento) e chácaras (71,1 por cento) não diferiu estatisticamente. As hortaliças das chácaras mostraram-se mais parasitadas por protozoários (10/47) que as das feiras (19/114). Larvas de Rhabditoidea e ovos de Ancylostomatoidea encontravam-se igualmente distribuídos nas hortaliças de ambos os locais. Formas parasitárias de outras espécies foram também encontradas. Todas as amostras de alface crespa coletadas nas chácaras estavam contaminadas por bactérias totais e termoto-lerantes em índices não compatíveis com o consumo humano. São discutidos ainda a dificuldade em se diagnosticar laboratorialmente gênero e espécie de parasitas de interesse humano observados em hortaliças e os desafios da vigilância epidemiológica na busca de boa qualidade para hortaliças ingeridas cruas.

This work had the objective of performing a parasitological evaluation of fresh vegetables colleted from production places and free markets of Maringá, Paraná. From July/2002 to July/2004, 66 samples were collected in 13 smallholdings and 181 samples in 17 free markets. Heads of lettuce (varieties flat, curly and American), watercress and rocket salad, picked up randomly and in triplicate, were submitted to Oliveira & Germano's and Kynioun staining techniques and to the research of total and thermotolerant coliforms. The total index of parasitism of the vegetables of free markets (63%) and smallholdings (71.1%) didn't differ statistically. The fresh vegetables from smallholdings have shown more protozoa than (10/47) that from the free markets (19/114). Rhabditoidea larvae and Ancylostomatoidea eggs were equally distributed in the fresh vegetables of both places. Parasitic forms of other species were also found. All the curly lettuce samples collected in the smallholdings presented total and thermotolerant bacteria index incompatible with the human consumption. The difficult in doing laboratorial diagnose at the genre and specie level of the human parasites in fresh vegetables and the sanitary surveillance challenges in the obtaining of good quality products were discussed.